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多肽合成、修飾與偶聯

產品簡介

多肽合成
采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽,把不需要反應的氨基羧基用基團保護起來,再進行連接反應,保證定向反應的順利進行。

產品型號:
更新時間:2020-05-14
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多肽合成

采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽,把不需要反應的氨基羧基用基團保護起來,再進行連接反應,保證定向反應的順利進行。

液相法和固相法是多肽合成的主要方法。固相法具有可自動化操作,產物易分離的優(yōu)勢而被更加廣泛地使用。分為Fmoc和tBoc法,由于前者具有更大優(yōu)勢,故如今多采用Fmoc法合成。

基本流程:

1.      去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去除氨基的保護基團。

2.      激活和交聯:下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應交聯,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環(huán):這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。

3.      洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA)洗脫和脫保護。

 

多肽的修飾

多肽修飾是改變肽鏈主鏈結構和側鏈基團的重要手段。多肽修飾的方法主要分為液相法和固相法。常見的多肽修飾是乙?;?,烷基化,生物素修飾,磷酸化或磺酸化等。具體修飾原理以組蛋白的乙?;癁槔?/span>

組蛋白中賴氨酸的N端殘基可發(fā)生乙?;铱赡?。在乙?;D移酶的作用下,在賴氨酸的N短引入乙酰基。

 

多肽的耦聯

多肽的偶聯有三種方式:偶聯在多肽的N端的氨基酸上;偶聯在多肽的C端氨基酸上;偶聯在多肽序列中的半胱氨酸上。

用于與多肽耦聯的載體蛋白有多種,其中常用的是keyhole limpethemacyanin (KLH),牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA),卵清蛋白(ovalbumin,OVA)和牛甲狀腺球蛋白(bovine thyroglobulin,THY)。KLH具有更高的抗原性,是常用的多肽耦聯載體。

EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)或carbodiimide方法是將多肽和載體耦聯的常用方法。Carbodiimides能激活天冬酰胺酸及谷氨酸的側鏈羧基集團及末端羧基集團,使之與主胺基發(fā)生耦聯反應。激活的多肽與載體蛋白混合而產生終的共軛體。如果載體蛋白先被激活,EDC方法則通過N-末端alpha-氨基,或者,如果序列中有賴氨酸的話,則可以通過賴氨酸的側鏈氨基與載體蛋白耦聯。

 

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