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熒光素酶報(bào)告分析實(shí)驗(yàn)

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熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。與熒光蛋白不同的是,熒光素酶不需要額外光源,但是需要加入熒光素。

產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2020-05-14
廠商性質(zhì):代理商
訪問(wèn)量:1500
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熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過(guò)程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。與熒光蛋白不同的是,熒光素酶不需要額外光源,但是需要加入熒光素。

 

熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合的重要手段。大致流程如下:

1.        構(gòu)建一個(gè)將靶啟動(dòng)子的特定片段插入到熒光素酶表達(dá)序列前方的報(bào)告基因質(zhì)粒,如pGL3-basic等。

2.        將要檢測(cè)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其它相關(guān)的細(xì)胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動(dòng)子,則熒光素酶基因就會(huì)表達(dá),熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。

3.        加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應(yīng),產(chǎn)生熒光,通過(guò)檢測(cè)熒光的強(qiáng)度可以測(cè)定熒光素酶的活性,從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動(dòng)子片段有作用。除此以外,該實(shí)驗(yàn)可以研究microRNA對(duì)靶基因的調(diào)控。

 

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